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【生物课件】动物细胞融合与单克隆抗体复*课件

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一、动物细胞融合 1.概念:两个或多个 动物细胞结合形成一个细胞的过程,也称, 细胞杂交 。 2.原理:与植物原生质体融合的原理相似,即膜的 流动性 。 3.结果:形成 单核杂交细胞 ,具有原来两个或多个细胞的遗传 信息。 4.诱导方法:聚乙二醇、 灭活的病毒 、电激等。 5.意义 (1)突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能。 (2)是研究细胞遗传、免疫、肿瘤和新品种培育的重要手段。 (3)利用 杂交瘤 技术制备单克隆抗体。 二、单克隆抗体 1.传统抗体的制备 (2)缺点:产量低、 纯度 低、 特异性 差。 2.单克隆抗体的制备过程 (2)解决思路:将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合为 杂交瘤细胞 。 (3)制备过程 3.单克隆抗体的特点和应用 (1)优点: 特异性强、灵敏度高 、产量大。 (2)应用 ①作为 诊断试剂,具有准确、高效、简易、快速的优点。 ②用于 治疗疾病 和 运载药物 。 一、动物细胞融合 阅读教材P52,仔细观察图2-23,探讨下列问题: 1.比较植物体细胞杂交与动物细胞融合的区别。 提示:细胞膜的流动性、细胞的全能性 细胞膜的流动性 原 生质体 植物组织培养 灭活的病毒 2.诱导动物细胞融合特有的诱导手段是什么? 提示:灭活的病毒。 二、单克隆抗体的制备 阅读教材P52~54,仔细观察图2-24,探讨下列问题: 1.单克隆抗体制备时为什么用免疫小鼠? 提示:免疫小鼠能产生相应的B淋巴细胞,从而产生抗体。 2.为什么用多个B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合? 提示:(1)细胞融合成功率太低,仅用两个细胞融合,不一定能 得到融合细胞。 (2)用大量免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞进行融合,并从融合 细胞中筛选才能得到分泌所需抗体的杂交瘤细胞。 3.细胞融合后会得到哪些杂交细胞?我们需要的是哪种杂 交细胞? 提示:得到的细胞有:未融合的亲本细胞、融合的具有同 种核的细胞(融有2个B淋巴细胞核或是2个骨髓瘤细胞核)、 融合的杂种细胞(即杂交瘤细胞)。需要的是杂交瘤细胞。 4.对得到的杂交瘤细胞还需做哪些处理?为什么? 提示:筛选、克隆化培养、抗体检测。因为培养的目的是 获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。 5.在单克隆抗体制备过程中经过了几次筛选?作用分别是 什么? 提示:两次。第一次:从多种杂交细胞中筛选出杂交瘤细 胞。第二次:利用专一抗体检测阳性,筛选出能够产生所 需特异性抗体的杂交瘤细胞群。 6.获取单克隆抗体的场所在哪里? 提示:(1)若在培养基中进行杂交瘤细胞培养,则从培养液 中提取。(2)若在小鼠或其他动物腹腔中培养,则从腹水中 提取。 7.请写出单克隆抗体的制备流程。 提示: 下列对植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较,描 述正确的是( ) A.动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同,诱 导融合的方法也完全相同 B.只有植物体细胞杂交可跨越种属间的生殖隔离,突破了 有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能 C.利用动物细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术,为生 产单克隆抗体开辟了新途径 D.目前科学家终于实现了两个植物物种间的体细胞杂交, 得到了同时具有两个物种遗传物质的超级植物,并使它们的 性状全部得以体现 [解析] 动物细胞融合的诱导方法有生物方法,如用灭活的 病毒,而植物原生质体融合没有生物方法;两个植物物种间 的体细胞杂交,得到了同时具有两个物种遗传物质的超级植 物,并不一定使它们的性状都能得以体现,这是基因选择性 表达的结果。 [答案] C 动物细胞融合中的诱导剂 (1)常用的病毒诱导剂有仙台病毒、新城鸡瘟病毒、疱疹病毒 等,其中仙台病毒最常用。 (2)用作诱导剂的病毒必须事先灭活,使病毒的感染活性、增 殖能力丧失但不破坏病毒的抗原结构。 人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养层细 胞分泌的一种糖蛋白,制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断 。如图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图,请分析回答问题: (1)制备单克隆抗体过程中要用到_________和__________技 术。 (2)制备单克隆抗体过程中,给小鼠注射的HCG相当于 ________,使小鼠产生分泌相应________的淋巴细胞,此过 程属于特异性免疫中的________免疫。 (3)在细胞内DNA的合成一般有两条途径,主途径是在细胞内 由糖和氨基酸合成核苷酸,进而合成DNA,而氨基嘌呤可以 阻断此途径;另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存 在的情况下,经酶催化作用合成DNA,而骨髓瘤细胞的DNA合 成没有此辅助途径。 ①利用DNA合成途径不同的特点配制的HAT培养基含有 多种成分,其中添加的________成分具有筛选杂交瘤 细胞的作用。 ②最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是 ___________________。 (4)此过程生产的单克隆抗体可以与______________特 异性结合,从而诊断早孕。 【研析】 本题主要考查单克隆抗体制备的原理和过程及 识图分析问题的能力。具体解题过程如下: [审]——提取信息 信息a:图示中对B淋巴细胞和骨髓瘤细胞加“促 融剂”及“培养”。 信息b:题干信息制备的单克隆抗体的用途是 “抗HCG”。 信息c:氨基嘌呤可以阻断DNA合成的主途径, 且骨髓瘤细胞的DNA合成无辅助途径。 [析]——解读信 息 解读信息a:在给定的两类细胞中加促融剂的目的就 是为了实现细胞融合,在HAT培养基上培养、克隆化 培养及大规模培养的均为细胞即涉及的细胞工程技术 为动物细胞培养。 解读信息b:制备的单克隆抗体对抗的是“HCG”,即 HCG应为抗原。 解读信息c:骨髓瘤细胞的DNA合成只有主途径,若 在HAT培养基中加入氨基嘌呤,则其主途径被阻断, 最终导致其无法增殖。 [联]——联系基础 设问(1)可联系:动物细胞工程的技术手段即动物细胞培养、 动物细胞核移植、动物细胞融合及生产单克隆抗



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